Služby - Molekulární genetika

Gen BRAF je lokalizovaný v chromozomálním regionu 7q34, skládá se z 18 exonů a délka transkribované mRNA je 2478 bp. Gen kóduje protein příslušející k rodině raf/mil serin/threoninových kináz. Protein hraje důležitou úlohu v regulaci MAPK/ERK signální kaskády, která ovlivňuje buněčné dělení, diferenciaci a sekreci.

Mutace genu BRAF jsou asociovány s řadou nádorů (kolorektální karcinom, maligní melanom, non-Hodgkin lymfom, thyroidní papilární karcinom, nemalobuněčný karcinom plic a adenokarcinom plic). 80% mutací je způsobeno transverzí T1799A, která vede k aminokyselinové záměně V600E. Mutace V600E propůjčuje buňkám transformační aktivitu, protože simuluje fosforylaci na T599 a/nebo S602 v aktivační doméně proteinu BRAF. Díky tomu zůstává protein BRAF permanentně v aktivním stavu, bez ohledu na signalizaci RAS.

Provádíme vyšetření části exonu 15 se zaměřením na detekci mutace V600E. K vyšetření používáme PCR amplifikaci daného úseku a přímé sekvenování (obr. 1) a reverzní hybridizaci (KRAS-BRAF StripAssay).

Obrázek 1
Mutace V600E genu BRAF.