Služby - Molekulární genetika

Translokace t(8;14) (q24;q32), jejímž následkem je fúze genu C-MYC a genu pro těžký řetězec imunoglobulinu (IgH), představuje nejčastější aberaci, která se vyskytuje u Burkitova lymfomu (BL). Ve zbývajících případech BL nalézáme zejména t(8;22) (q24;q11), jejíž důsledkem je fúze genu C-MYC a genu pro lehký řetězec kappa, nebo t(2;8) (p11;q24), jež vede k fúzi genu C-MYC a genu pro lehký řetězec lambda. C-MYC je transkripční faktor, který hraje důležitou roli v regulaci buněčného cyklu, apoptózy a buněčné transformace, proto deregulace jeho exprese je významným faktorem neoplastického procesu.

Přesné místo translokace se liší u endemického a sporadického BL. U endemického BL se t(8;14) vyskytuje na 5’ konci ve vzdálenosti do 300 kb před kódujícím regionem C-MYC. U sporadického BL translokace charakteristicky zahrnuje bod zlomu uvnitř genu C-MYC. Stejné translokace se mohou také vyskytovat v Burkitt like lymfomech a v malém procentu difúzních velkobuněčných B-lymfomů.

Současně detekované translokace C-MYC a t(14;18) lze najít u části atypických BL, jež vznikají z folikulárního lymfomu. Tyto lymfomy se pak vyznačují agresivním průběhem onemocnění.

V současné době se nejčastěji k detekci translokací zahrnujících C-MYC používá fluorescenční in-situ hybridizace (FISH). Využití PCR a southern blotu je minoritní.

V naší laboratoři máme k dispozici 2 různé FISH sondy od firmy Vysis/Abbott. Výsledkem hybridizace u normálního jádra při použití LSI IGH/MYC, CEP 8 Tri-color, Dual Fusion Translocation sondy jsou dva aqua, dva zelené a dva oranžové signály. V případě t(8;14) vidíme dva aqua, po jednom zeleném a oranžovém a jeden fúzní signál na jádro. Normálním nálezem v případě LSI MYC Dual Color, Break Apart Rearrangement sondy jsou dva fúzní signály a v případě translokace t(8;22)(q24;q11) nebo t(2;8)(p11;q24) pozorujeme jeden oranžový, jeden zelený a jeden fúzní signál na jádro.

FISH
Při FISH detekujeme pomocí MYC Dual Color, Break Apart Rearrangement Probe firmy Vysis/Abbott zlom genu MYC (tato próba neidentifikuje specifického translokačního partnera). U vzorku pozitivního na rearanži genu MYC pozorujeme jeden žlutý, jeden červený a jeden zelený signál (obr. 1). U negativního vzorku pak dva žluté signály (obr. 2). („dual color“ filtr)

Obrázek 1
Jádro pozitivní na zlom genu MYC.

Obrázek 2
Jádro negativní na zlom genu MYC.

1. Neri A, Barriga F, Knowles DM, Magrath IT, Dalla-Favera R.Different regions of the immunoglobulin heavy-chain locus are involved in chromosomal translocations in distinct pathogenetic forms of Burkitt lymphoma.Proc Natl Acad Sci U S A. 1988 Apr;85(8):2748-52.
2. Busch K, Borkhardt A, Wossmann W, Reiter A, Harbott J.Combined polymerase chain reaction methods to detect c-myc/IgH rearrangement in childhood Burkitt's lymphoma for minimal residual disease analysis.Haematologica. 2004 Jul;89(7):818-25.