Služby - Molekulární genetika

Tumorsupresorový gen CYLD1 je lokalizovaný na 16q12-q13. Obsahuje 20 exonů, přičemž první tři nejsou translatovány. Jeho cDNA kóduje 956 aminokyselin, vyskytuje se však i zkrácená varianta, která postrádá exon 7 a kóduje protein s 953 aminokyselinami.

CYLD1 patří mezi deubiquitinizační enzymy. Svoji aktivitou negativně reguluje cytokinem zprostředkovanou aktivaci NF-kappa-B kinázy, která je potřebná pro buněčnou homeostázu přídatných kožních orgánů (vlasové folikuly, mazové žlázy, ekrinní a apokrinní žlázy). Ztráta deubiquitinizační aktivity CYLD1 genu zvyšuje odolnost k apoptóze a tím koreluje s nádorovou transformací.

Recentně byly popsány mutace v tomto genu u Brooke-Spieglerova syndromu, familiární cylindromatózy a mnohočetné familiární trichoepiteliózy. Tyto původně jednotlivě popsané entity sdílejí některé společné klinické znaky a proto se nyní považují za jediný genetický syndrom s rozdílným fenotypem. Pacienti mají predispozice k mnohočetným nádorům kožních adnexů, jako jsou cylindromy, spiroadenomy, spiradenocylindromy, trichoepiteliomy, a jiným nádorům kůže a vnitřních orgánů. Ztráty heterozygotnosti (LOH) v oblasti tohoto genu byly detekovány i ve značném množství sporadických cylindromů. Spektrum mutací nalezených v CYLD1 genu je široké. Ve většině případů byly v CYLD1 genu detekovány zárodečné mutace, nicméně somatické mutace se vyskytovaly také. Z molekulárně genetického hlediska se jednalo o mutace způsobené posunem čtecího rámce díky malým insercím či delecím v genu, záměny bazí, které vedly k vytvoření předčasného stop kodónu, a mutace, které změnily místo sestřihu. Všechny z těchto mutací predikovaly zkrácený protein.

V naší laboratoři provádíme DNA screening všech 20 exonů genu CYLD1. DNA izolujeme z tkáně (FFPE) či krve. Primery pro PCR amplifikaci jsou navrženy tak, aby bylo možné detekovat i případnou mutaci místa sestřihu. Produkt analyzujeme přímou sekvencí (obr. 1).

Obrázek 1.
Mutace genu CYLD1. Inzerce c.2170_2171insTC způsobující frame-shift mutaci s předčasným stop kodónem p.K724IfsX12.

1. Biggs, P. J.; Chapman, P.; Lakhani, S. R.; Burn, J.; Stratton, M. R. : The cylindromatosis gene (cyld1) on chromosome 16q may be the only tumour suppressor gene involved in the development of cylindromas. Oncogene 12: 1375-1377, 1996.
2. Bignell, G. R.; Warren, W.; Seal, S.; Takahashi, M.; Rapley, E.; Barfoot, R.; Green, H.; Brown, C.; Biggs, P. J.; Lakhani, S. R.; Jones, C.; Hansen, J.; and 29 others : Identification of the familial cylindromatosis tumour-suppressor gene. Nature Genet. 25: 160-165, 2000.
3. Trompouki, E.; Hatzivassiliou, E.; Tsichritzis, T.; Farmer, H.; Ashworth, A.; Mosialos, G. : CYLD is a deubiquitinating enzyme that negatively regulates NF-kappa-B activation by TNFR family members. Nature 424: 793-796, 2003.
4. Young AL, Kellermayer R, Szigeti R, Teszas A, Azmi S, Celebi JT. CYLD mutations underlie Brooke-Spiegler, familial cylindromatosis, and multiple familial trichoepithelioma syndromes. Clin Genet. 2006 Sep;70(3):246-9.