Služby - Molekulární genetika

Translokace t(11;14) (q13;q32) je specifickým genetickým markerem lymfomů z plášťových buněk (mantle cell lymphoma, MCL). Recentní práce naznačují, že se tato translokace vyskytuje téměř u všech MCL. Kromě MCL však byla translokace t(11;14) vyjímečně popsána i u jiných lymfomů a leukemií, z nichž relativně častěji je prokazována u mnohotného myelomu.

Při chromozomální translokaci t(11;14) (q13;q32) dochází k fúzi joining regionu genu pro těžký řetězec imunoglobulinu (IgH) na chromozómu 14 a nekódující části genu bcl-1 (cyklin D1 (CCND1), prad1) na chromozómu 11. Při této fúzi se dostává gen pro cyklin D1 pod vliv enhanceru genu pro IgH, v důsledku čehož dochází k overexpresi cyklinu D1 a tím narušení rovnováhy ústřední dráhy buněčného cyklu. Ke zlomům v lokusu bcl-1 dochází u 30 - 55 % případů v tzv. hlavním translokačním klastru (major translocation cluster, MTC), ale u 10 - 20 % případů byly identifikovány i další regiony distálně od MTC.

Translokaci t(11;14) (q13;q32) a overexpresi cyklinu D1 lze poměrně snadno detekovat molekulárně biologickými a cytogenetickými metodami. Výsledky těchto vyšetření pak umožňují přesnější a spolehlivější diagnózu zejména u takových případů, kdy je pouze na základě morfologie a imunohistochemie obtížné odlišit MCL od chronické lymfatické leukemie, folikulárního lymfomu, či lymfomu marginální zóny, a mají tak zásadní vliv na další léčbu a tím i osud pacienta.

K detekci translokace t(11;14) (q13;q32) byla vyvinuta řada postupů. V současné době jsou zřejmě nejvíce využívané techniky založené na PCR (polymerase chain reaction) a FISH (fluorescence in-situ hybridisation). V naší laboratoři využíváme dvoukolovou PCR se sadami primerů překrývající MTC region, jež v případě pozitivního vzorku amplifikují, v závislosti na umístění zlomu, fragment o délce cca 200 - 300 bp detekovatelný na agarózové elektroforéze (obr. 1). Pro interfázní FISH využíváme komerčně dostupnou translokační sondu IgH/CCND1 Dual Color, Dual Fusion Translocation Probe firmy Vysis/Abbott. U této sondy získáme u normálního jádra dva červené a dva zelené fluorescenční signály (obr. 2a). U vzorku pozitivního na translokaci t(11;14) (q13;q32) pak pozorujeme dva fúzní žluté signály z translokovaných chromozómů a po jednom červeném a zeleném z nepostižených chromozómů (obr. 2b).

Obrázek 1
Agarózový gel s fúzními produkty PCR detekujícími translokaci t(11;14) (q13;q32). 1,4,5,6 - negativní vzorky, 2,3 - pozitivní vzorky, 7 - pozitivní kontrola, 8 - negativní kontrola, 9 - voda.

Obrázek 2
FISH analýza translokace t(11;14) (q13;q32) na jádrech izolovaných z parafinem zalité formalinem fixované tkáně.

A) Jádro negativní na translokaci t(11;14) (q13;q32)

B) Jádro pozitivní na translokaci t(11;14) (q13;q32)

1. Lasota J, Franssila K, Koo CH, Miettinen M. Molecular diagnosis of mantle cell lymphoma in paraffin-embedded tissue. Mod Pathol. 1996;9(4):361-6.
2. de Boer CJ, van Krieken JH, Schuuring E, Kluin PM. Bcl-1/cyclin D1 in malignant lymphoma. Ann Oncol. 1997;8 Suppl 2:109-17.
3. Li JY, Gaillard F, Moreau A, Harousseau JL, Laboisse C, Milpied N, Bataille R, Avet-Loiseau H. Detection of translocation t(11;14)(q13;q32) in mantle cell lymphoma by fluorescence in situ hybridization. Am J Pathol. 1999;154(5):1449-52.
4. World Health Organisation Classification of Tumours: Pathology and Genetics. Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Ed. Jaffe, ES, Harris, NL, Stein, H, Vardiman JW. IARC Press, Lyon, 2001.