Služby - Molekulární genetika

Translokace t(14;18) (q32;q21) je jednou z nejlépe charakterizovaných cytogenetických abnormalit u B lymfoproliferativních onemocnění. Je typickým markerem folikulárních lymfomů a v menší míře také difůzních velkobuněčných B lymfomů.

Při chromozomální translokaci t(14;18) (q32;q21) dochází k fúzi oblasti v okolí jednoho z JH regionů genu pro těžký řetězec imunoglobulinu (IgH) na chromozómu 14 a genu bcl-2 na chromozómu 18. Při této fúzi se dostává antiapoptotický gen bcl-2 pod vliv enhanceru genu pro IgH, v důsledku čehož dochází k deregulaci jeho normální exprese a narušení apoptotických procesů. Ke zlomům v bcl-2 genu dochází asi v 70% případů v tzv. major breakpoint regionu (MBR) lokalizovaném v 3' netranslatované oblasti exonu 3 tohoto genu a dále pak v oblasti zvané minor cluster region (MCR) lokalizovaném asi 20 kb distálně od MBR.

Translokaci t(14;18) (q32;q21) lze, stejně jako řadu dalších translokací, poměrně snadno detekovat molekulárně biologickými a cytogenetickými metodami. V současnosti zřejmě nejužívanější techniky zahrnují různé verze PCR (polymerase chain reaction) a FISH (fluorescence in-situ hybridisation).

V naší laboratoři užíváme jednokolovou multiplex PCR se sadami primerů překrývající MBR a MCR, jež v případě pozitivního vzorku amplifikují fragment o variabilní délce detekovatelný na agarózové elektroforéze (obr. 1).

Obrázek 1
Agarózový gel s fúzními produkty PCR detekujícími translokaci t(14;18) (q32;q21). MBR multiplex

FISH
Pro interfázní FISH využíváme komerčně dostupnou translokační sondu IgH/BCL2 Dual Color, Dual Fusion Translocation Probe firmy Vysis/Abbott. U této sondy získáme u normálního jádra dva červené a dva zelené fluorescenční signály (obr. 2A). U vzorku pozitivního na translokaci t(14;18) (q32;q21) pak pozorujeme dva fúzní žluté signály z translokovaných chromozómů a po jednom červeném a zeleném z nepostižených chromozómů (obr. 2B).

Obrázek 2.

A) Jádro negativní na translokaci t(14;18) (q32;q21)

B) Jádro pozitivní na translokaci t(14;18) (q32;q21)

1. World Health Organisation Classification of Tumours: Pathology and Genetics. Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Ed. Jaffe, ES, Harris, NL, Stein, H, Vardiman JW. IARC Press, Lyon, 2001.
2. van Dongen JJ, Langerak AW, Bruggemann M, Evans PA, Hummel M, Lavender FL, Delabesse E, Davi F, Schuuring E, Garcia-Sanz R, van Krieken JH, Droese J, Gonzalez D, Bastard C, White HE, Spaargaren M, Gonzalez M, Parreira A, Smith JL, Morgan GJ, Kneba M, Macintyre EA. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia. 2003;17(12):2257-2317.